Pewarnaan Ziehl Neelsen

Uji diferensial untuk Mengidentifikasi Bakteri Mycobacterium dan Nocardia

Bakteri Tahan Asam (pink) dan bakteri Tidak Tahan Asam (biru)  

Mycobacterium dan Nocardia adalah penyebab  penyakit menular, seperti tuberkulosis, kusta dan infeksi   paru-paru serta kulit.lainnya.  Oleh karena itu, jelas penting untuk dapat mengidentifikasi secara akurat anggota genus ini.

Dinding Sel  mikobakteri dan Nocardia 
Bakteri Mycobacterium  dan Nocardia memiliki dinding sel yang tidak biasa , yang licin dan sukar ditembus karena adanya asam mycolic dan sejumlah besar asam lemak, lilin, danlipidkompleks. Organisme ini sangat tahan terhadap desinfektan, pengeringan dan sulit untuk diwarnai dengan  pewarna berbasis air seperti Gram.

  Pewarnaan Tahan Asam memerlukan teknik pewarnaan khusus yang menggunakan panas untuk menambah daya tembus cat  masuk ke dalam dinding sel lilin bakteri

Membuat preparat (mear) yang akan dicat Tahan Asam.

Smear adalah sampel bakteri tersuspensi dalam jumlah kecil air pada slide. sampel itu kemudian dikeringkan dengan panas. Panas membunuh bakteri dan melekatkan sampel ke slide sehingga tidak mudah terbilas..

Gambar : prosedur pewarnaan tahan asam 

Pengecatan BTA Ziehl Neelsen 

Maksud         : Cara mengidentifikasi Bakteri Tahan Asam (BTA) menggunakan metode pengecatan    Ziehl 

                         Nielsen  

Tujuan           : Diagnosis

Sampel          : sputum, lesi, Swab, pus, urine, darah, faeces, liquor, pleura, ascites,dll.

Alat                 :

-       Lampu Spirtus/bunzen

-       Obyek glass

-       Rak pengecatan

-       Ose   

-       Pipet pasteur

-       mikroskop

Reagen            :

1.    Carbol fuchsin :

        -   Basic fuchsin                                       3,0 gr

        -   Etanol/methanol                                  100 ml

        -   Kristal phenol                                      45 gr

        -   Aquadest                                             900 ml

2.    larutan dekolorisasi :

        -   HCl pekat                                            30 ml

        -   Etanol                                                  970 ml

3.   Warna pembandung :

        -   Methylen blue khlorida                       30 ml

        -   Air suling/aquadest                             1000 ml

Cara kerja     :

Protokol untuk pewarnaan tahan asam adalah sebagai berikut:

-  Letakkan slide di atas bak air panas
-  Genangi slide dengan carbol fuchsin (pewarna utama)  
-  Biarkan slide di atas bak air yang dipanaskan selama 3 - 5 menit, tambahkan larutan carbol fuchsin jika
    mulai mengering.
-  Angkat slide   dan bilas sampai bersih dan tak ada lagi cat yang terbawa air bilasan.
 - Tuangi slide dengan decolorizer, Asam Alkohol, selama 10 - 15 detik dan kemudian bilas.
 - Tuangi slide dengan counterstain, Metilen blue, selama satu menit dan kemudian bilas.
-  Keringkan slide. Sekarang siap untuk ditampilkan di bawah rmkroskop menggunakan minyak (1000x)          
Interpretasi 

   

Sel  Tahan Asam  akan berwarna merah muda, karena menyerap carbol  fuschion    dengan bantuan pemanasan   Sel Non Tahan Asam, (bakteri yang tidak memiliki dinding sel lilin) akan berwarna biru,


Referensi :

Bauman, R. (2005) Mikrobiologi.

http://pemburumikroba.blogspot.com