Pemeriksaan Widal

1. Prinsip
   Reaksi aglutinasi, yaitu ikatan antigen yang melekat pada permukaan partikel / sel (insoluble) dengan antibodi spesifik yang diamati sebagai gumpalan (clumping).
2. Tujuan
   Untuk mengetahui adanya antibodi spesifik terhadap bakteri Salmonella
3. Alat dan Bahan
   
   ·         Bahan pemeriksaan : serum
   ·         Tabung reaksi : 10
   
   ·         Pipet volume
   ·         Mikropipet
   ·         Slide
   ·         NaCl 0,9%
   ·         Water bath
   ·         Kit pemeriksaan Widal / Micropath antigens (Omega diagnostics)
4. Prosedur Rapid Test
   
   ·         Siapkan slide yang diberi 3 lingkaran
   ·         Dengan mikropipet masukkan serum ke dalam masing-masing lingkaran dengan volume berturut-turut : 80 ul, 40 ul, dan 20 ul
   ·         Tambahkan ke dalam masing-masing serum 1 tetes antigen (pengenceran 1:20, 1:40, dan 1:80)
   ·         Campurkan dengan cara digoyang-goyangkan selama 1 menit
   ·         Perhatikan aglutinasi yang terjadi. Setiap sampel yang menunjukkan aglutinasi sebaiknya dikonfirmasi dengan Tube Aglutination Test
   
   
5. Prosedur Tube Aglutination Test
   
   ·         Siapkan 10 tabung reaksi dan susunlah dalam 1 rak. Beri nomor 1 –10
   ·         Dengan pipet masukkan 1,9 ml NaCl pada tabung 1
   ·         Dengan pipet masukkan 1 ml NaCl pada masing-masing tabung 2-10
   ·         Masukkan 0,1 ml serum pada tabung 1 dan campur hingga homogen
   ·         Ambil 1 ml campuran tabung 1 dan masukkan tabung 2. Tabung 2 dicampur hingga homogen, dan ambil 1 ml untuk dimasukkan tabung 3 , dan seterusnya hingga tabung 9
   ·         Ambil 1 ml larutan pada tabung 9 dan dibuang
   ·         Tambahkan setiap tabung 1 tetes antigen. Dengan demikian didapatkan pengenceran pada tabung 1 – 9 berturut-turut : 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320, 1/640, 1/1280, 1/2560.
   ·         Tabung 10 hanya berisi NaCl dan antigen, serta berfungsi sebagai kontrol
   ·         Campur larutan hingga homogen dan inkubasikan sebagai berikut :
   - Titrasi O : 50^o C selama 4 jam
   - Titrasi H : 50^o C selama 2 jam
   ·         Pada kontrol antigen harus tidak terdapat aglutinasi
   ·         Hasil : Adanya aglutinasi menunjukkan adanya antibodi
6. Catatan
   
   Antigen yang digunakan : Antigen O dan H
   ·         Ag O : bagian tertular dari LPS dinding sel
   - Antigen somatik
   - Tahan panas dan Alkohol
   ·         Ag H : terdapat pada flagella
   - Dirusak oleh panas dan alkohol
   INPRESTASI HASIL
   ·         Titer O yang tinggi (> : 160) atau kenaikan titer menunjukkan infeksi aktif
   ·         Titer H yang tinggi (> : 160) menunjukkan peran divaksinasi/pernah terinfeksi